Hora de publicación: 2022-09-15 Origen: Sitio
En principio, el laboratorio de amplificación de genes clínicos se divide en cuatro áreas de trabajo separadas: área de almacenamiento y preparación de reactivos, área de preparación de muestras, preparación de la mezcla de reacción de amplificación y área de amplificación, y área de análisis de productos de amplificación. Para evitar la contaminación cruzada, ingresar a cada área de trabajo debe seguir estrictamente una sola dirección, es decir, solo del área de almacenamiento y preparación de reactivos → Área de preparación de muestras → Amplificación Reacción de reacción de reacción de preparación y área de amplificación → Área de análisis de productos de amplificación.
La transferencia de reactivos y muestras entre las áreas experimentales se realizará a través de la ventana de transferencia.
(3) Diseño del sistema de aire acondicionado y ventilación y control de presión del laboratorio de PCR
No existen requisitos de purificación estrictos para los laboratorios de PCR, pero para evitar la posibilidad de contaminación cruzada entre varias áreas experimentales, es apropiado adoptar la forma de distribución de aire de todos los envíos y todas las descargas. Al mismo tiempo, la proporción de suministro de aire y escape debe controlarse estrictamente para garantizar los requisitos de presión de cada área experimental.
Área de almacenamiento y preparación de reactivos
Las operaciones principales en esta área experimental son la preparación de reactivos de almacenamiento, el subcalorle de reactivos y la preparación de la mezcla de reacción principal. Los reactivos y los materiales utilizados para la preparación de la muestra se transportarán directamente a esta área y no pasarán por otras áreas. Las materias primas de reactivos deben almacenarse en esta área y prepararse en reactivos de almacenamiento requeridos en esta área.
No hay requisitos estrictos para el control de la presión del flujo de aire en esta área.
Área de preparación de muestras
Las operaciones principales en esta área son la preservación de muestras clínicas, la extracción y el almacenamiento de ácidos nucleicos (ARN y ADN), y la síntesis de ADNc cuando se agrega al tubo de reacción de amplificación y se mide el ARN.
Se requiere que el gradiente de presión en esta área sea una presión positiva en relación con el área adyacente para evitar la contaminación del aerosol que ingresa a esta área desde el área adyacente. Además, dado que puede ocurrir la contaminación del aerosol durante la operación de muestreo, se debe evitar caminar innecesario en el área.
Amplificación de reacción de reacción de preparación y área de amplificación
La operación principal en esta región es la amplificación de ADN o ADNc. Además, la adición de la plantilla de ADN preparada y el ADNc sintetizado (del área de preparación de la muestra) y la preparación de la mezcla de reacción principal (desde el área de almacenamiento y preparación de reactivos) en la mezcla de reacción también se pueden llevar a cabo en esta área . En la determinación de PCR anidada, el tubo de reacción debe abrirse después de la primera ronda de amplificación, por lo que la amplificación anidada tiene un alto riesgo de contaminación, y el segundo muestreo debe llevarse a cabo en esta área.
Se requiere que el gradiente de presión en esta área sea una presión negativa en relación con el área adyacente para evitar la fuga de aerosol de esta área. Para evitar la contaminación causada por los aerosoles, se debe minimizar la caminata innecesaria en el área. Las operaciones individuales, como la adición de muestra, se llevarán a cabo en el banco ultra limpio.
Área de análisis de productos de amplificación
La operación principal en esta área es la determinación de fragmentos amplificados. Si se utiliza un instrumento analítico cerrado completo de e-outomático para la detección, esta área no puede estar establecida.
Esta área es la principal fuente de contaminación del producto de amplificación, por lo que se requiere que el gradiente de presión en esta área sea una presión negativa en relación con el área adyacente, para evitar que el producto de amplificación se difunda de esta área a otras áreas.
(4) Prevención y control de la contaminación
El problema central del diseño de laboratorio de PCR es cómo evitar la contaminación. En el trabajo práctico, los siguientes tipos de contaminación son comunes: contaminación de productos de amplificación; Contaminación del ADN genómico natural; Contaminación de reactivos y muestras. Una vez que ocurre la contaminación, el experimento debe detenerse hasta que se encuentre la fuente de contaminación, y los resultados experimentales deben invalidarse y el experimento debe llevarse a cabo nuevamente. Por lo tanto, no solo lleva mucho tiempo y es engorroso encontrar la fuente de contaminación alrededor del laboratorio después de que ocurre la contaminación, que desperdicia mano de obra y recursos materiales. Por lo tanto, para evitar la contaminación, la prevención debe ser el primer paso, no la eliminación.